Resposta: A puromicina é um antibiótico aminonucleosídeo, derivado da bactéria de Streptomyces alboniger, que causa terminação prematura da cadeia durante a tradução no ribossomo. Parte da molécula se assemelha à extremidade 3 ‘do tRNA aminoacilado.
A puromicina mata células humanas?
A dose recomendada como agente de seleção nas culturas celulares está dentro de uma faixa de 1-10 îg/ml, embora possa ser tóxica para células eucarióticas em concentrações tão baixas quanto 1 îg/ml. A puromicina atua rapidamente e pode matar até 99% das células não resistentes em 2 dias .
Para que é a puromicina usada?
A puromicina é um antibiótico que impede a tradução da proteína bacteriana . É utilizado como um agente seletivo em culturas de células de laboratório. A puromicina é tóxica para células procarióticas e eucarióticas, resultando em morte celular significativa em doses apropriadas.
Quanto tempo dura a mídia puromicina?
Sugestões: 1) Se você precisar adicionar a puromicina à sua mídia, deixe a mídia à temperatura ambiente para aquecer a partir do armazenamento 4C em vez de usar o banho de água. Isso o manterá estável por ~ 3 semanas .
Que tipo de antibiótico é puromicina?
puromicina é um antibiótico aminonucleosídeo produzido por Streptomyces Alboniger. Inibe especificamente a transferência de peptidil nos ribossomos procarióticos e eucarióticos. Este antibiótico inibe o crescimento de bactérias Gram positivas e várias células animais e de insetos.
Com que rapidez a puromicina mata células?
Titular puromicina
Eficácia ideal deve ser alcançada em 1-4 dias . A concentração mínima de antibióticos para usar é a menor concentração que mata 100% das células em 3-5 dias após o início da seleção de puromicina.
Quanta puromicina devo levar para seleção?
O antibiótico
puromicina garante uma seleção positiva eficaz de células que expressam o gene puromicina-n-acetil-transferase (PAC). Nas células de mamíferos, a faixa de concentração de trabalho recomendada para puromicina é 0,5 – 10 µg/ml.
Como você trata as células com puromicina?
Um método que usamos mais recentemente foi transfectar as células conforme o procedimento normal e, em seguida, 24 horas depois, tratar com puromicina. Você precisará fazer uma curva de matar puromicina em suas células primeiro para verificar qual a concentração de puromicina mata 100% das células não transfectadas. Normalmente entre 1-10ug/ml de obras.
O que você dilui a puromicina?
Usando um estoque de 1 mg/ml de puromicina, prepare cinco diluições na concentração final de 2x, diluindo o estoque em mídia, como mostrado na Tabela 1, coluna C & D. (quando a concentração de antibióticos 2x é diluída com um volume igual de volume de igual Suspensão celular resultará na concentração final mostrada na Tabela 1, coluna b).
Como você faz estoque de puromicina?
Este produto é solúvel em água a 50 mg/ml. Uma solução estoque deve ser preparada por filtração usando um filtro de 0,22 îm e depois armazenada em alíquotas a -20 ° C. Este produto também é solúvel em metanol a 10 mg/ml.
Para que é usado a anisomicina?
anisomicina tem sido amplamente utilizada como um inibidor da síntese de proteínas em estudos sobre aprendizado e memória, bem como plasticidade sináptica . No entanto, seu modo de ação é complicado. Além da inibição da tradução, este medicamento mostra outros efeitos, de maneira mais proeminente nas proteínas quinases ativadas por mitogênio.
O que é a seleção G418?
gibco® Geneticin Oltic® Antibiótico seletivo (sulfato de G418) é usado como um antibiótico seletivo na faixa de concentração de 100 – 200 µg/ml para bactérias, ou 200 – 500 µg/ml para A maioria das células de mamíferos. Este produto é fornecido como uma solução de 50 mg/ml na água. Oferecemos uma variedade de antibióticos de cultura de células para sua conveniência.
Como funciona o mRNA?
A exibição do mRNA
é uma técnica de exibição usada para proteína in vitro e/ou evolução do peptídeo para criar moléculas que podem se ligar a um alvo desejado . … As fusões de mRNA-proteína que se ligam bem são então transcritas reversas para cDNA e sua sequência amplificada por meio de uma reação em cadeia da polimerase.
Quando devo começar a seleção de puromicina?
A seleção (adição de puromicina ao meio de cultura de células) geralmente é iniciada por volta de 24 horas após a transfecção . Você também pode iniciar a seleção a 48 horas, dependendo da saúde de suas células transfectadas.
Como você armazena puromicina?
armazenamento e estabilidade:
puromicina é enviada à temperatura ambiente . Após o recebimento, deve ser armazenado a 4 ° C ou -20 ° C. A puromicina é estável por dois anos a -20 ° C, dois anos a 4 ° C e 3 meses à temperatura ambiente. Evite ciclos de congelamento repetido.
A puromicina é solúvel em água?
O produto é solúvel em água (50 mg/ml), produzindo uma solução amarela clara e incolor a fraca. A solução estoque pode ser passada através de um filtro de 0,22 µm e armazenada em alíquotas a 20 â â ° C. Também é solúvel em metanol (10 mg/ml).
é sensível à luz de puromicina?
O di -hidrocloreto de puromicina é sensível à luz no par com a sensibilidade da luz da maioria dos meios basais como o DMEM e o RPMI 1640. Recomendamos limitar a exposição deste produto à luz o máximo possível (ou seja ,. << /p>
Como as células transfectas do lentivírus?
c. transdução
- descongelar o lentivírus no gelo. Misture 8 polibeno (alíquota de 1 mg/ml) com a cultura 957 µl. …
- No dia seguinte, troca a mistura de lentivírus/polibeno por meio de cultura fresca. Incubar células em condições de cultura celular padrão. …
- variam de 0,1 a 10 îg/ml. Substitua o meio de cultura 48-72 horas.
As concentrações
Como você faz uma linha celular estável?
O protocolo para gerar linhas celulares estáveis ??requer várias etapas, como mostrado abaixo:
- Gere uma curva de matar para determinar a concentração ideal de antibióticos de seleção.
- células transfectas com construções de plasmídeo desejado (s)
- Selecione e expanda colônias policlonais estáveis.
- Identifique clones únicos por diluição e expansão limitadas.
Qual antibiótico inibe a tradução tanto em procariontes quanto eucariotos?
Antibióticos que bloqueiam a tradução. puromicina atua nas células procarióticas e eucarióticas. Possui uma estrutura semelhante à da extremidade 3 ² do portador de aminoacil-tRNA da tirosina ou fenilalanina.