Jawaban: Puromisin adalah antibiotik aminonukleosida, yang berasal dari bakteri Streptomyces alboniger, yang menyebabkan penghentian rantai prematur selama penerjemahan mengambil tempat di ribosom. Bagian dari molekul menyerupai ujung 3 ‘dari tRNA aminoacylated.
Apakah puromisin membunuh sel manusia?
Dosis yang direkomendasikan sebagai agen seleksi dalam kultur sel berada dalam kisaran 1-10 î¼g/mL, meskipun dapat beracun bagi sel eukariotik pada konsentrasi serendah 1 î¼g/mL. Puromycin bertindak dengan cepat dan dapat membunuh hingga 99% dari sel yang tidak tahan dalam 2 hari .
Untuk apa puromycin digunakan?
Puromisin adalah antibiotik yang mencegah terjemahan protein bakteri . Ini digunakan sebagai agen selektif dalam kultur sel laboratorium. Puromisin beracun bagi sel prokariotik dan eukariotik, yang mengakibatkan kematian sel yang signifikan pada dosis yang tepat.
Berapa lama media puromisin bertahan?
Saran: 1) Jika Anda perlu menambahkan puromycin ke media Anda, tinggalkan media pada suhu kamar untuk melakukan pemanasan dari penyimpanan 4C alih -alih menggunakan Waterbath. Ini akan tetap stabil untuk ~ 3 minggu .
Apa jenis antibiotik puromycin?
Puromisin adalah antibiotik aminonukleosida yang diproduksi oleh Streptomyces alboniger. Ini secara khusus menghambat transfer peptidil pada ribosom prokariotik dan eukariotik. Antibiotik ini menghambat pertumbuhan bakteri positif gram dan berbagai sel hewan dan serangga.
Seberapa cepat puromycin membunuh sel?
Titrating puromycin
Efektivitas optimal harus dicapai dalam 1-4 hari . Konsentrasi antibiotik minimum untuk digunakan adalah konsentrasi terendah yang membunuh 100% sel dalam 3-5 hari dari awal seleksi puromisin.
Berapa banyak puromycin yang harus saya ambil untuk seleksi?
Antibiotik puromisin memastikan seleksi positif sel yang efektif yang mengekspresikan gen puromycin-n-acetyl- transferase (PAC). Dalam sel mamalia, rentang konsentrasi kerja yang direkomendasikan untuk puromisin adalah 0,5 – 10 Â?g/ml.
Bagaimana Anda mengobati sel dengan puromycin?
Suatu metode yang kami gunakan baru -baru ini adalah mentransfeksi sel sesuai prosedur normal, kemudian 24 jam kemudian, perlakukan dengan puromisin. Anda harus melakukan kurva pembunuhan puromisin pada sel Anda pertama -tama untuk memeriksa konsentrasi puromisin apa yang membunuh 100% sel yang tidak ditransfeksi. Biasanya antara 1-10ug/ml bekerja.
apa yang Anda encerkan puromycin?
Menggunakan stok puromisin 1mg/ml, siapkan lima pengenceran pada konsentrasi akhir 2x, dengan mengencerkan stok dalam media seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1, kolom C & D. (ketika konsentrasi antibiotik 2x diencerkan dengan volume yang sama dari Suspensi Sel Ini akan menghasilkan konsentrasi akhir yang ditunjukkan pada Tabel 1, kolom B).
Bagaimana Anda membuat stok puromisin?
Produk ini larut dalam air pada 50 mg/ml. Solusi stok harus disiapkan dengan filtrasi menggunakan filter 0,22 î¼m dan kemudian disimpan dalam alikuot pada -20 ° C. Produk ini juga larut dalam metanol pada 10 mg/ml.
Untuk apa anisomycin digunakan?
Anisomycin telah banyak digunakan sebagai penghambat sintesis protein dalam studi tentang pembelajaran dan memori serta plastisitas sinaptik . Namun, cara tindakannya rumit. Selain penghambatan terjemahan, obat ini menampilkan efek lain, yang paling menonjol pada protein kinase yang diaktifkan mitogen.
Apa pilihan G418?
Gibcoâ® Geneticinâ® antibiotik selektif (G418 sulfat) digunakan sebagai antibiotik selektif dalam kisaran konsentrasi 100 – 200 â ?g/mL untuk bakteri, atau 200 â 500 â ?g/mL untuk kebanyakan sel mamalia. Produk ini disediakan sebagai larutan 50 mg/ml dalam air. Kami menawarkan berbagai antibiotik kultur sel untuk kenyamanan Anda.
Bagaimana cara kerja tampilan mRNA?
Tampilan mRNA adalah teknik tampilan yang digunakan untuk protein in vitro, dan/atau evolusi peptida untuk membuat molekul yang dapat mengikat target yang diinginkan . … fusi mRNA-protein yang mengikat sumur kemudian ditranskripsi terbalik ke cDNA dan urutannya diamplifikasi melalui reaksi berantai polimerase.
Kapan saya harus memulai seleksi puromisin?
Seleksi (penambahan puromisin ke media kultur sel) biasanya dimulai sekitar 24 jam setelah transfeksi . Anda juga dapat memulai seleksi pada 48 jam tergantung pada kesehatan sel yang ditransfeksi.
Bagaimana Anda menyimpan puromycin?
Penyimpanan dan stabilitas:
Puromycin dikirimkan pada suhu kamar . Setelah diterima harus disimpan pada suhu 4 ° C atau -20 ° C. Puromycin stabil selama dua tahun pada -20 ° C, dua tahun pada suhu 4 ° C, dan 3 bulan pada suhu kamar. Hindari siklus beku yang berulang.
Apakah puromisin larut dalam air?
Produk ini larut dalam air (50 mg/ml), menghasilkan larutan kuning yang jelas, tidak berwarna hingga pingsan. Larutan stok dapat dilewatkan melalui filter 0,22 µm dan disimpan dalam alikuot di â 20 Â ° C. Ini juga larut dalam metanol (10 mg/ml).
apakah puromycin cahaya sensitif?
Puromycin dihydrochloride adalah sensitif cahaya pada par dengan sensitivitas cahaya dari sebagian besar media basal seperti DMEM dan RPMI 1640. Kami akan merekomendasikan membatasi paparan produk ini untuk menyala sebanyak mungkin (mis. /p>
Bagaimana sel transfect lentivirus?
c. transduksi
- Mencairkan lentivirus di atas es. Campurkan 8 Â?l polybrene (1 mg/ml alikuot) dengan kultur 957 â ?L. …
- Keesokan harinya, pertukaran campuran lentivirus/polybrene dengan media kultur segar. Inkubasi sel pada kondisi kultur sel standar. …
- Konsentrasi berkisar dari 0,1-10 î¼g/ml. Ganti media kultur 48-72 jam.
- Menghasilkan kurva membunuh untuk menentukan konsentrasi antibiotik seleksi optimal.
- Sel transfect dengan konstruk plasmid yang diinginkan <)
- Pilih dan perluas koloni poliklonal yang stabil.
- Identifikasi klon tunggal dengan pengenceran dan ekspansi terbatas.
Bagaimana Anda membuat garis sel yang stabil?
Protokol untuk menghasilkan garis sel yang stabil memerlukan beberapa langkah seperti yang ditunjukkan di bawah ini:
Antibiotik mana yang menghambat terjemahan baik dalam prokariota dan eukariota?
Antibiotik yang memblokir terjemahan. puromycin bertindak pada sel prokariotik dan eukariotik. Ini memiliki struktur yang mirip dengan ujung 3â ² dari pembawa aminoacyl-tRNA dari tirosin atau fenilalanin.