Antwort: Puromycin ist ein Aminonukleosid -Antibiotikum, das aus dem Streptomyces -Alboniger -Bakterium abgeleitet ist und die eine vorzeitige Kettenabschlusspartierung während der Translation verursacht, die in Ribosom eingenommen wird. Ein Teil des Moleküls ähnelt dem 3′ -Ende der aminoacylierten tRNA.
tötet Puromycin menschliche Zellen?
Die empfohlene Dosis als Selektionsmittel in Zellkulturen liegt innerhalb eines Bereichs von 1-10 î¼g/ml, obwohl sie für eukaryotische Zellen in Konzentrationen von nur 1 î¼g/ml toxisch sein kann. Puromycin wirkt schnell und kann bis zu 99% der nicht resistenten Zellen innerhalb von 2 Tagen abtöten.
wofür wird Puromycin verwendet?
Puromycin ist ein Antibiotikum, das Bakterienprotein Translation verhindert. Es wird als selektives Mittel in Laborzellkulturen verwendet. Puromycin ist sowohl für prokaryotische als auch für eukaryotische Zellen toxisch, was zu einem signifikanten Zelltod in geeigneten Dosen führt.
Wie lange dauert Media Puromycin?
Vorschläge: 1) Wenn Sie das Puromycin zu Ihren Medien hinzufügen müssen, lassen Sie die Medien bei Raumtemperatur auf 4C -Lagerung aufgewärmen, anstatt die Wasserbad zu verwenden. Dies hält es für ~ 3 Wochen .
stabilWelche Art von Antibiotika ist Puromycin?
Puromycin ist ein Aminonukleosid -Antibiotika , das von Streptomyces alboniger produziert wird. Es hemmt spezifisch den Peptidyltransfer sowohl an prokaryotischen als auch an eukaryotischen Ribosomen. Dieses Antibiotikum hemmt das Wachstum von Gram -positiven Bakterien und verschiedenen tierischen und Insektenzellen.
wie schnell tötet Puromycin Zellen ab?
titrierendes Puromycin
optimale Wirksamkeit sollte in 1-4 Tagen erreicht werden . Die zu verwendende minimale Antibiotika-Konzentration ist die niedrigste Konzentration, die 100% der Zellen in 3-5 Tagen ab Beginn der Puromycin-Selektion abtötet.
Wie viel Puromycin soll ich zur Auswahl einnehmen?
Puromycin-Antibiotikum sorgt für eine wirksame positive Selektion von Zellen, die das Puromycin-N-Acetyl-Transferase-Gen (PAC) exprimieren. In Säugetierzellen beträgt der empfohlene Arbeitskonzentrationsbereich für Puromycin 0,5 10 µg/ml.
Wie behandeln Sie Zellen mit Puromycin?
Eine Methode, die wir zuletzt verwendet haben, bestand darin, die Zellen nach normalem Verfahren zu transfizieren und dann 24 Stunden später mit Puromycin zu behandeln. Sie müssen eine Puromycin -Kill -Kurve auf Ihren Zellen zuerst durchführen, um zu überprüfen, welche Konzentration von Puromycin 100% der nicht transfizierten Zellen abtötet. Normalerweise funktioniert zwischen 1-10ug/ml.
was verdünnen Sie Puromycin?
Verwenden eines 1 mg/ml -Puromycin -Bestands von fünf Verdünnungen bei der 2x -Endkonzentration, indem der Bestand in den Medien verdünnt wird, wie in Tabelle 1, Spalte C & D gezeigt Zellsuspension Es führt zu der Endkonzentration in Tabelle 1, Spalte B).
Wie macht man Puromycin -Bestand?
Dieses Produkt ist in Wasser mit 50 mg/ml löslich. Eine Stammlösung sollte durch Filtration unter Verwendung eines 0,22 ¼m -Filters hergestellt und dann in Aliquots bei -20 ° C gelagert werden. Dieses Produkt ist auch in Methanol bei 10 mg/ml löslich.
wofür wird Anisomycin verwendet?
Anisomycin wurde in Studien zu Lernen und Gedächtnis sowie der synaptischen Plastizität als ein Inhibitor der Proteinsynthese verwendet. Die Wirkungsweise ist jedoch kompliziert. Neben der Hemmung der Translation zeigt dieses Arzneimittel andere Wirkungen, die am deutlichsten auf Mitogen-aktivierte Proteinkinasen sind.
Was ist G418 -Auswahl?
gibco® Geneticin® Selektives Antibiotika (G418 -Sulfat) wird als selektives Antibiotikum im Konzentrationsbereich von 100 bis 200 µg/ml für Bakterien oder 200 verwendet Die meisten Säugetierzellen. Dieses Produkt wird als 50 mg/ml Lösung in Wasser geliefert. Wir bieten eine Vielzahl von Zellkultur -Antibiotika für Ihre Bequemlichkeit.
Wie funktioniert die mRNA -Anzeige?
mRNA -Anzeige ist eine Anzeige -Technik für In -vitro -Protein und/oder Peptidentwicklung, um Moleküle zu erzeugen, die an ein gewünschtes Ziel binden können. … Die mRNA-Protein-Fusionen, die gut binden
Wann sollte ich mit der Puromycin -Auswahl beginnen?
Die Selektion (Zugabe von Puromycin zum Zellkulturmedium) wird normalerweise um 24 Stunden nach der Transfektion gestartet. Sie können die Auswahl abhängig von der Gesundheit Ihrer transfizierten Zellen auch bei 48 Stunden beginnen.
Wie speichern Sie Puromycin?
Lagerung und Stabilität:
Puromycin wird bei Raumtemperatur versendet. Nach Erhalt sollte es bei 4 ° C oder -20 ° C gelagert werden. Puromycin ist zwei Jahre lang bei -20 ° C, zwei Jahre bei 4 ° C und 3 Monate bei Raumtemperatur stabil. Vermeiden Sie wiederholte Gefrierzyklen.
Ist Puromycin in Wasser löslich?
Das Produkt ist löslich in Wasser (50 mg/ml) und liefert eine klare, farblose bis schwache gelbe Lösung. Die Stammlösung kann durch einen 0,22 âgr; -filter geleitet und in Aliquots bei ’20 ° C gelagert werden. Es ist auch in Methanol (10 mg/ml) löslich.
Ist Puromycin -lichtempfindlich?
Puromycin Dihydrochlorid ist auf Par mit der Lichtempfindlichkeit der meisten basalen Medien wie DMEM und RPMI 1640. /p>
Wie transfizieren Lentivirus Zellen?
c. Transduktion
- thaw the lentivirus auf Eis. Mischen Sie 8 µl Polybren (1 mg/ml Aliquot) mit 957 µl Kultur. …
- Am nächsten Tag austauschen Sie Lentivirus/Polybren -Mischung durch frisches Kulturmedium. Inkubieren Sie Zellen bei Standard -Zellkulturbedingungen. …
- Konzentrationen reichen von 0,1-10 î¼g/ml. Ersetzen Sie das Kulturmedium 48-72 Stunden.
Wie macht man eine stabile Zelllinie?
Das Protokoll zur Erzeugung stabiler Zelllinien erfordert mehrere Schritte, wie unten gezeigt:
- Erzeugen Sie eine Kill -Kurve, um die optimale Antibiotika -Konzentration der Selektion zu bestimmen.
- Zellen mit dem gewünschten Plasmidkonstrukt (s)
- Stabile polyklonale Kolonien auswählen und erweitern.
- Identifizieren Sie einzelne Klone durch begrenzte Verdünnung und Ausdehnung.
transfekten
Welches Antibiotika hemmt die Translation sowohl in Prokaryoten als auch in Eukaryoten?
Antibiotika, die die Übersetzung blockieren. puromycin wirkt sowohl auf prokaryotische als auch auf eukaryotische Zellen. Es hat eine ähnliche Struktur wie das 3 ² Ende des Aminoacyl-TRNA-Trägers von Tyrosin oder Phenylalanin.