المبدأ الأساسي لـ PCR المتعدد هو نفس المبدأ PCR التقليدي ، باستثناء أن أكثر من زوج من الاشعال مطلوب في نفس التفاعل . يمكن أن تجمع الاشعال على وجه التحديد مع قالب الحمض النووي المقابل ، وسيتم تضخيم أكثر من جزء واحد من الحمض النووي في رد فعل واحد في وقت واحد.
كيف تختلف PCR Multiplex عن PCR القياسي؟
في PCR التقليدية PCR ، يتم تضخيم هدف واحد في أنبوب رد فعل واحد. في المقابل ، يتيح Multiplex PCR تضخيمًا متزامنًا لتسلسلات مستهدفة متعددة في أنبوب واحد باستخدام مجموعات تمهيدية محددة في تركيبة مع تحقيقات المسمى مع فلوروفورات متميزة طيفية.
ما هو العامل الأكثر أهمية في PCR multiplex؟
مهم بشكل خاص لفحص PCR متعدد الإرسال الناجح هي التركيزات النسبية للاشعال في المواقع المختلفة ، وتركيز المخزن المؤقت PCR ، ودرجات حرارة ركوب الدراجات والتوازن بين كلوريد المغنيسيوم وتركيزات ديوكسينوكليوتيد .
كم عدد أنواع PCR الموجودة؟
long – النطاق PCR-تتشكل نطاقات أطول من الحمض النووي باستخدام مزيج من البوليميرات. التجميع PCR – شظايا الحمض النووي الأطول يتم فرضها باستخدام الاشعال المتداخلة. PCR غير متماثل – يتم تضخيم حبلا واحد فقط من الحمض النووي المستهدف. في الموقع PCR – PCR الذي يحدث في الخلايا ، أو في الأنسجة الثابتة على شريحة.
ما هي مزايا PCR متعددة؟
مزايا pcr multiplex
مزيد من المعلومات مع عينة أقل . إنتاجية أعلى . فعالة من حيث التكلفة – أقل من DNTPs ، والإنزيمات ، وغيرها من المواد الاستهلاكية. الوقت الادخار.
ما هي خطوات PCR؟
يعتمد
PCR على ثلاث خطوات بسيطة مطلوبة لأي تفاعل تخليق الحمض النووي: (1) تمويل القالب في خيوط واحدة ؛ (2) تلدين الاشعال لكل حبلا أصلي لتخليق حبلا جديد ؛ و (3) تمديد خيوط الحمض النووي الجديدة من الاشعال.
ما هو PCR القياسي؟
بالنسبة إلى PCR القياسي ، كل ما تحتاجه هو بوليميريز الحمض النووي ، المغنيسيوم ، النيوكليوتيدات ، الاشعال ، قالب الحمض النووي المراد تضخيمه و thermocycler. … يستخدم PCR على نطاق واسع لتضخيم الحمض النووي للاستخدام التجريبي اللاحق. يحتوي PCR أيضًا على تطبيقات في الاختبار الجيني أو للكشف عن الحمض النووي المسببة للأمراض.
ما هي الخطوات الأربع لـ PCR؟
خطوات PCR موضحة
- الخطوة 1 – تمويل. يتم تسخين المحلول الموجود في الأنبوب إلى 94 درجة مئوية على الأقل (201.2 درجة فهرنهايت) باستخدام سير حراري. …
- الخطوة 2 – الصلب. …
- الخطوة 3 – التمديد. …
- الخطوة 4 – التحليل مع الكهربائي.
ما هو جهاز PCR في الوقت الفعلي؟
يتكون نظام الكشف في PCR في الوقت الفعلي من cycler الحراري المجهز بوحدة الكشف البصرية لقياس إشارة التألق الناتجة خلال كل دورة تضخيم حيث يرتبط الفلوروفور بالتسلسل الهدف.
كيف يمكنك إنشاء اختبار PCR؟
عند تصميم الاشعال لفحص PCR ، اتبع هذه الخطوات:
- تحقق من الأدب وقواعد البيانات للبلاشات الموجودة.
- اختر تسلسلًا مستهدفًا.
- التصميم الاشعال.
- تحقق من خصوصية التمهيدي.
- تقييم خصائص التمهيدي (درجة حرارة الانصهار ، الهيكل الثانوي ، التكامل).
- حدد خصائص منتج PCR.
ماذا تفعل Hot PCR؟
Hot Start PCR يسمح بإعداد التفاعل في درجة حرارة الغرفة دون تضخيم غير محدد وتشكيل Dimer التمهيدي . بينما يتم استخدام PCR التقليدي غالبًا لصنع نسخ أسية من تسلسل هدف الحمض النووي الخاص بك دون مكون إضافي لتنشيط التفاعل.
ما الذي يستخدمه PCR الرقمي؟
تفاعل سلسلة البلمرة الرقمية (PCR Digital ، DigitalPCR ، DPCR ، أو DEPCR) هو صقل التكنولوجيا الحيوية لطرق تفاعل سلسلة البوليميريز التقليدية التي يمكن استخدامها لقياس خيوط الأحماض النووية وتضخيمها بشكل مباشر بما في ذلك الحمض النووي ، [CDNA ، أو RNA .
كيف يمكنك جعل التمهيدي لـ multiplex pcr؟
ميزات التمهيدي المفتاح
- تم تصميم الاشعال PCR عمومًا ليكون طوله 18 عامًا. …
- يجب أن تتراوح درجة حرارة الانصهار (TM) من الاشعال بين 58 درجة مئوية – 60 درجة مئوية ، ويجب أن يكون لجميع الاشعال في التفاعل TM خلال 0.5 – 1 ° C من بعضها البعض. …
- يجب أن يتراوح محتوى GC من الاشعال بين 40 ٪ و 60 ٪.
ما هو غير متماثل PCR المستخدم لـ؟
يمكن استخدام PCR غير المتماثل لتشكيل الحمض النووي المفرد من الحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل ، والذي يتم استخدامه بعد ذلك لتسلسل الحمض النووي في طريقة الطفرات. الحمض النووي المفرد الذي تقطعت بهم السبل هو أيضا مهم لتوليد aptamer.
ما هو المبدأ الأساسي لـ PCR؟
مبدأها هو استنادًا إلى استخدام بوليميريز الحمض النووي الذي هو تكرار في المختبر لتسلسل الحمض النووي المحدد. يمكن أن تولد هذه الطريقة عشرات المليارات من نسخ جزء من الحمض النووي معين (تسلسل الاهتمام ، أو الحمض النووي ذي الاهتمام ، أو الحمض النووي المستهدف) من مستخلص الحمض النووي (قالب الحمض النووي).
ما هي الخطوات الخمسة لـ PCR؟
للحصول على نقطة النهاية الفعالة PCR مع نتائج سريعة وموثوقة ، إليك خمس خطوات رئيسية يجب مراعاتها:
- الخطوة 1DNA العزلة.
- تصميم 2Primer.
- STEP 3ENZYME SELECT.
- الخطوة 4thermal Cycling.
- تحليل 5Amplicon.
ما هو المطلوب لـ PCR؟
المكونات الرئيسية لتفاعل PCR هي polymerase ، الاشعال ، الحمض النووي القالب ، والنوكليوتيدات (لبنات بناء الحمض النووي). يتم تجميع المكونات في أنبوب ، إلى جانب العوامل المساعدة التي يحتاجها الإنزيم ، ويتم وضعها من خلال دورات متكررة من التدفئة والتبريد التي تسمح بتوليف الحمض النووي.
ما هو الفرق بين واحد و pcr multiplex؟
في PCR التقليدية PCR ، يتم تضخيم هدف واحد في أنبوب رد فعل واحد. في المقابل ، يتيح PCR متعدد الإرسال للتضخيم المتزامن لتسلسلات مستهدف متعددة في أنبوب واحد باستخدام مجموعات التمهيدي المحددة في تركيبة مع تحقيقات مصممة بفلوروفورات متميزة طيفية.
ما هي تطبيقات PCR المتداخلة؟
تطبيقات PCR المتداخلة
الكشف عن ريكيتشيا ، بارتونلا ، والكائنات الحية المماثلة في الدم (بكتيريا الدم) والأنسجة ، والكشف عن فيروس الهربس وفيروس الأدوار في CSF ، و. الكشف عن مرض السل في عينة البلغم.
ما هي الأنواع الثلاثة من PCR؟
أنواع PCR
- في الوقت الفعلي PCR.
- الوقت الكمي في الوقت الحقيقي PCR (Q-RT PCR)
- النسخ العكسي PCR (RT-PCR)
- multiplex pcr.
- متداخل pcr.
- PCR طويل المدى
- خلية واحدة pcr.
- تدوير سريع pcr.
ما هي الأنواع الرئيسية من PCR؟
بعض الأنواع الشائعة من PCR هي ؛
- PCR في الوقت الفعلي (PCR الكمي أو QPCR)
- عكسي ترانسيدز (RT-PCR)
- multiplex pcr.
- متداخل pcr.
- Fidelity PCR.
- Fast PCR.
- البدء الساخن pcr.
- PCR الغني GC.
ما الصك المستخدم لـ PCR؟
cycler الحراري (المعروف أيضًا باسم thermocycler ، آلة PCR أو مضخم الحمض النووي) هو جهاز مختبر يستخدم لتضخيم شرائح الحمض النووي عبر تفاعل سلسلة البلمرة (PCR). يحتوي الجهاز على كتلة حرارية مع ثقوب حيث يمكن إدخال أنابيب تحمل خلائط تفاعل PCR.