تجربة لطخة غربية ، أو النشاف الغربي (تسمى أيضًا المناعة ، لأنه تم استخدام يتم استخدام الأجسام المضادة للكشف عن مستضدها على وجه التحديد بواسطة Towbin ، وآخرون. … تتيح خصوصية التفاعل بين الأجسام المضادة للمستضد من التعرف على البروتين المستهدف في خضم خليط البروتين المعقد.
هل لطخة غربية اختبار الأجسام المضادة؟
اختبار اللطخة الغربية هو اختبار الأجسام المضادة التي يتم على عينة دم . يتم استخدامه لتأكيد أو دحض نتائج اختبار سابق لمرض فيروس نقص المناعة البشرية أو لايم. أنتجت التطورات التكنولوجية اختبارات أكثر دقة تعطي نتائج أسرع من اختبار لطخة غربية.
هل تستخدم اللطخة الغربية الأجسام المضادة الأولية والثانوية؟
يتعرف الجسم المضاد الأساسي على ويربط الحلق أو تسلسل حمض الأميني المحدد للبروتين ذي الاهتمام. … عادة ما تكون الأجسام المضادة الثانوية المستخدمة في النشاف الغربي مترافقًا مع إنزيم ؛ الإنزيمات الأكثر استخدامًا هي بيروكسيداز الفجل (HRP) والفوسفاتيز القلوي (AP).
كم من الوقت يمكنك ترك لطخة غربية في الجسم المضاد الأساسي؟
دائمًا الجسم المضاد الأساسي لاستخدام الحد الأقصى بين عشية وضحاها أو 24 ساعة (4 درجة مئوية) . متجر الغشاء في PBS أو TBST Buffer 4â ° C Weekend أو 2 إلى 4 أيام بخير.
هل تحتاج اللطخة الغربية إلى جسم مضاد ثانوي؟
النشاف الغربي هو طريقة حساسة للغاية. ترتبط الأجسام المضادة الأولية مباشرة بالبروتين ذي الاهتمام ، ولكن ما لم يتم ربطها مباشرة بصبغة أو إنزيم ، هناك حاجة إلى جسم مضاد ثانوي للكشف . …
ما هو أكثر دقة ELISA أو لطخة غربية؟
بالمقارنة مع ELISA ، النشاف الغربي له خصوصية أعلى ؛ كلما كانت الخصوصية العليا ، كلما كانت الطريقة مستقلة عن خصوصية الأجسام المضادة.
ما هو استبدال الاختبارات التأكيدية لطخة غربية؟
منذ عام 2014 ، أوصت مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها (CDC) على وقف اختبار لطخة غربية. الآن ، تستخدم معظم المختبرات immunoassay لمستضد HIVP24 والأجسام المضادة لـ HIV-1 و 2 ، تليها مقاس تأكيدي للتمييز بين HIV-1 و HIV-2.
لماذا تستخدم الأجسام المضادة في لطخة غربية؟
يتم استخدام الأجسام المضادة للكشف عن البروتينات المستهدفة على اللطخة الغربية (Immunoblot). يتم ربط الأجسام المضادة بالملصقات الفلورية أو الإشعاعية أو الإنزيمات التي تعطي رد فعل لاحق مع كاشف مطبق ، مما يؤدي إلى تلوين أو انبعاث للضوء ، مما يتيح الكشف.
ما الذي تستخدم اللطخة الغربية للكشف؟
لطخة غربية هي طريقة مختبر تستخدم للكشف عن جزيئات بروتين محددة من بين مزيج من البروتينات . يمكن أن يشمل هذا الخليط جميع البروتينات المرتبطة بنسيج معين أو نوع الخلية. … بمجرد اكتمال النقل ، يحمل الغشاء جميع نطاقات البروتين في الأصل على الجل.
ما هو اختبار لطخة غربية المستخدمة لـ؟
يتم استخدام اختبار لطخة غربية عادة لتأكيد تشخيص فيروس نقص المناعة البشرية الإيجابي . أثناء الاختبار ، يتم أخذ عينة صغيرة من الدم ويستخدم للكشف عن الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية ، وليس فيروس فيروس نقص المناعة البشرية نفسه.
ما هو الغرض من النقل في بروتوكول لطخة غربية؟
الغرض من النشاف الغربي هو لفصل البروتينات على هلام وفقًا للوزن الجزيئي . ثم يتم نقل البروتينات على غشاء حيث يمكن اكتشافها باستخدام الأجسام المضادة.
هل الأجسام المضادة أحادية النسيلة أو متعددة النسيلة أفضل للرماة الغربي؟
غالبًا ما تتفوق الأجسام المضادة متعددة النسيلة على الأجسام المضادة أحادية النسيلة لأن أنواع الأجسام المضادة السائدة في مضادات متعددة النسيلة قد يكون لها تقارب أعلى بكثير للمستضد من الأجسام المضادة أحادية النسيلة ضد نفس المستضد.
ما هو مبدأ اللطخة الغربية؟
النشاف الغربي (النشاف البروتين أو المناعي) هو اختبار سريع وحساسي للكشف عن البروتينات وتوصيفها. يعتمد على مبدأ التصوير المناعي حيث يتم فصل البروتينات إلى هلام بولي أكريلاميد وفقًا لوزنها الجزيئي .
ما هو اللجند الأكثر شيوعًا في النشاف الغربي؟
ما هو اللجند الأكثر شيوعًا في النشاف الغربي؟ Explanation: يتم استخدام الروابط لتسهيل تفاعلات البروتين ليجند في تقنية النشاف. أكثر الروابط شيوعًا المستخدمة هي الأجسام المضادة .
هل لا يزال اختبار لطخة غربية قيد الاستخدام؟
ومع ذلك ، لم يعد يتم استخدام اللطخة الغربية ، واليوم يتبع اختبار ELISA اختبار تمايز فيروس نقص المناعة البشرية لتأكيد عدوى فيروس نقص المناعة البشرية. قد يطلب المزود أيضًا اختبار الكشف عن المواد الوراثية فيروس نقص المناعة البشرية.
ما الذي يمكن أن يسبب لطخة غربية إيجابية خاطئ؟
يمكن أن تكون التفاعل الخاطئ على فحوصات EIA أو لطخة غربية بسبب الأجسام المضادة HLA ، أو أمراض المناعة الذاتية (مثل الذئبة) ، التفاعل المتقاطع مع الخميرة ، أو إلى مستضدات ملوثة أخرى تستخدم لإعداد مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية . من غير المرجح أن تكون عدوى فيروس نقص المناعة البشرية في هذا السيناريو ، ومن المحتمل أن يكون هذا اختبارًا إيجابيًا إيجابيًا فيروس نقص المناعة البشرية.
ما هي المدة التي تستغرقها نتائج اللطخة الغربية؟
اختبار دم مرض لايم ، يتم استخدام لطخة غربية للكشف عن الأجسام المضادة الخاصة بـ B burgdorferi. التحضير: لا يوجد تحضير خاص مطلوب. نتائج الاختبار: 7-10 أيام . قد تستغرق وقتًا أطول بناءً على تأخيرات الطقس أو العطلات أو المختبر.
هل يمكنك استخدام الأجسام المضادة ELISA للبقاء الغربي؟
يمكن كلاهما استخدام نفس الأجسام المضادة للكشف ، ولكن في WB بعد خطوة الكهربائي ، وتفتقر ELISA إلى هذه الخطوة. استنادًا أخيرًا إلى الأجسام المضادة وخصائصه ، يمكننا استخدام الأجسام المضادة فقط في WB أو في ELISA أو في كلا التقنيتين. لكن لنيتك أقترح عليك ، باستخدام WB لخفض النتائج الإيجابية الخاطئة.
ماذا لا تستطيع اللطخة الغربية أن لا تستطيع Elisa؟
الأول هو النشاف الغربي ، الذي يكتشف المستضدات الفيروسية (البروتينات عادة على سطح الفيروسات) باستخدام الأجسام المضادة ضد تلك البروتينات. … نظرًا لأن الأجسام المضادة يمكن أن تستمر لفترة من الوقت بعد حدوث عدوى فيروس ، يمكن لـ ELISA اكتشاف الالتهابات التي حدثت منذ فترة.
لماذا تفضل ELISA على اللطخة الغربية؟
يرتبط هذا الجسم المضاد بالأجسام المضادة البشرية ويرتبط بالإنزيم. … تتمثل إحدى ميزة النشاف الغربي في أنه من غير المرجح أن يعطي نتائج إيجابية خاطئة لأنه يمكن أن يميز بشكل فعال بين الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية والأجسام المضادة الأخرى. تستخدم فحوصات ELISA الكشف عن الامتصاصية للبروتين ، وتقدير الحمض النووي.
ما مقدار الأجسام المضادة اللازمة للطبخ الغربي؟
عادةً ما يتم استخدام
الأجسام المضادة للنشاف الغربي كحلول مخففة ، وقد يوصي المصنعون باستخدام نطاقات من 1/100 “1/500000 التخفيف من محلول مخزون 1 ملغ/مل .
ما هو الغرض من استخدام جسم مضاد ثانوي في لطخة غربية؟
يساعد الجسم المضاد الثانوي في اكتشاف أو فرز أو تنقية المستضدات المستهدفة عن طريق الربط بالأجسام المضادة الأولية ، والتي ترتبط مباشرة بالمستضد المستهدف.
كيف يمكنك تخفيف الأجسام المضادة الأولية للأفلام الغربية؟
بالنسبة للبقع الغربية ، غشاء احتضان مع الأجسام المضادة الأولية المخففة في إما 5 ٪ ث/V BSA أو الحليب الجاف غير الدهني ، 1x tbs ، 0.1 ٪ tween ® 20 عند 4â مع 4 ° مع هز لطيف ، بين عشية وضحاها . ملاحظة: يرجى الرجوع إلى صفحة ويب منتج الأجسام المضادة الأولية لمؤسسة تخفيف الأجسام المضادة الأولية الموصى بها وتخفيف الأجسام المضادة الموصى بها.